2024-11-03 04:05:01
使用TCBS琼脂进行细菌分离实验的步骤如下:1.**准备工作**:-确保实验室无菌操作条件,穿戴适当的实验服和手套。-准备无菌的接种环、涂布器、无菌吸管和移液器等工具。2.**配制培养基**:-按照培养基包装上的说明,称取适量的TCBS琼脂粉末。-将称取的TCBS琼脂粉末加入到适量的蒸馏水中,通常为100mL。-将混合物加热至沸腾,以确保琼脂完全溶解。3.**冷却和倾注平板**:-将溶解好的培养基冷却至50℃左右(避免过热,以免杀死细菌),此时琼脂应该仍然是液体状态。-将冷却的培养基倒入无菌的培养皿中,一般倾注量为15-20mL/平皿。-等待琼脂凝固,形成固体培养基平板。4.**接种样品**:-使用无菌操作,将待检测的样品涂布或划线接种到TCBS琼脂平板上。-可以使用稀释涂布法、螺旋接种法或其他适当的接种方法。5.**培养**:-将接种后的平板倒置,放入恒温培养箱中。-根据实验要求,通常在36±1℃下培养18-24小时。6.**观察和选择菌落**:-培养结束后,观察平板上的生长情况,记录不同类型菌落的特征。-选择性地挑选出特定的菌落,如蓝绿色或黄色菌落,这些可能是目标弧菌。
CIN-1培养基基础是一种用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性培养基。其配方包含胰蛋白胨、酵母浸粉、甘露醇、氯化钠、去氧胆酸钠、硫酸镁、琼脂、Irgasan、中性红、结晶紫和氯化锶等成分,pH值约为7.5±0.1(25℃)。这种培养基通过其成分的选择性作用,可以有效地促进目标菌的生长,同时抑制其他非目标菌。**CIN-1培养基基础的用途**:主要用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌(GB标准)。**添加剂**:每瓶需配套添加CIN-1添加剂,每200mlCIN-1培养基基础添加1支HB0269-2。**配制方法**:称取58.0gCIN-1培养基基础,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,每瓶200ml,121℃高压灭菌15分钟,冷却至50℃左右时,加入一支过滤除菌的CIN-1添加剂(含头孢菌素3mg,新生霉素0.5mg),混匀,倾入无菌平皿。**检验原理**:胰蛋白胨和酵母浸粉提供菌体生长所需要的氮源、碳源和微量元素;甘露醇作为可发酵碳源;氯化钠维持培养基体系渗透压;硫酸镁提供菌体生长的微量元素;去氧胆酸钠和结晶紫能够抑制革兰氏阳性菌;中性红作为酸碱指示剂;琼脂是培养基的凝固剂。TSALTHTh平板CAS培养基的pH值通常控制在6.8±0.1(25℃),以保证微生物的生长和铁载体的活性 。
DTA培养基,也称为葡萄糖胰蛋白胨琼脂,是一种用于分离培养嗜热菌芽孢的培养基。以下是它的一些主要特点:1.**用途**:DTA培养基主要用于乳制品中嗜热需氧芽孢菌计数,以及嗜热菌芽孢(包括需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)的分离培养。2.**成分**:其配方包含胰酪蛋白胨、葡萄糖、琼脂和溴甲酚紫。具体成分为每升培养基中包含胰酪蛋白胨10.0克、葡萄糖5.0克、琼脂15.0克和溴甲酚紫0.04克。3.**pH值**:DTA培养基的pH值通常调节在6.7±0.1(25℃)。4.**检验原理**:胰酪蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖作为可发酵的糖,溴甲酚紫作为酸碱指示剂;琼脂作为凝固剂。5.**用法**:称取DTA培养基30.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。6.**生长特征**:嗜热脂肪芽孢杆菌在DTA培养基上的生长特征为黄色菌落。7.**质量控制**:进行微生物灵敏度试验时,按标签用法制备培养基,接种质控菌株,放置55℃需氧培养48小时。回收率计算时,用TSA琼脂做对照培养基。8.**储存条件**:DTA培养基应贮存于避光、干燥处,用后立即旋紧瓶盖;贮存期三年。
改良McBride琼脂基础(MMA)是一种用于微生物学研究和诊断的培养基,它具有一些特定的特点和用途:1.**选择性分离培养基**:改良McBride琼脂基础(MMA)主要用于李斯特氏菌的选择性分离。它通过添加特定的抗生物质或化学物质,抑制其他非目标微生物的生长,从而促进目标微生物——在这种情况下是李斯特氏菌的生长。2.**配方成分**:该培养基的配方包括酪胨、多价胨、牛肉浸粉、葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钠、甘氨酸、氯化锂和琼脂等。这些成分为微生物提供了生长所需的营养物质和环境。3.**pH值**:改良McBride琼脂基础(MMA)的pH值通常控制在7.3±0.2(25℃),这为李斯特氏菌的生长提供了适宜的酸碱环境。4.**添加物**:在使用时,每升培养基中需添加2.5g苯乙醇以及200mg环乙酰亚胺或30mg复达欣,这些添加物有助于抑制其他微生物的生长,提高李斯特氏菌分离的选择性。5.**高压灭菌**:在制备过程中,需要将培养基加热至完全溶解,然后进行121℃高压灭菌15分钟,以确保培养基的无菌性。6.**冷却和添加抗生物质**:灭菌后,培养基需要冷却至50℃,然后在无菌环境下加入抗生物质,备用。
PALCAM琼脂基础是一种专门设计用于分离和培养单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的选择性培养基。除了李斯特氏菌,它也可以用来分离其他类型的细菌,尽管其选择性成分主要针对李斯特氏菌。**特点**:1.**成分**:PALCAM琼脂基础包含酪蛋白胰酶消化物、心胰酶消化物、肉胃酶消化物、玉米淀粉、酵母浸膏、甘露醇、七叶苷、柠檬酸铁铵、葡萄糖、氯化锂、琼脂和酚红等成分。2.**pH值**:培养基的pH值控制在7.2±0.2(25℃),为细菌提供适宜的生长环境。3.**选择性**:氯化锂和抗生物质添加剂(如盐酸吖啶黄素、硫酸多粘菌素B和头孢他啶)能够抑制革兰氏阴性菌和大多数革兰氏阳性菌,特别是非李斯特氏菌的生长。4.**应用**:主要用于食品、水和污水样本中单核细胞增生李斯特氏菌的选择性分离培养。5.**结果观察**:李斯特氏菌在PALCAM琼脂上生长时,会水解七叶苷生成黑色的6,7-二羟基香豆素,形成灰绿色菌落,中心凹陷,周围有黑色环。尽管PALCAM琼脂基础主要用于李斯特氏菌的分离,但某些非李斯特氏菌,如葡萄球菌和肠球菌等,偶尔也能在该培养基上生长,利用甘露醇产酸使菌落和其周围的培养基呈黄色。
细菌保存培养基的基本原理是通过降低细菌的新陈代谢速度,使细菌的生命活动处于半永久性的休眠状态。哥伦比亚血琼脂培养皿
叠氮钠血琼脂基础(AzideBloodAgarBase)是一种选择性培养基,主要用于从粪便、污水和其他样本中分离和检测链球菌和葡萄球菌。以下是它的一些特点和配制方法:**特点**:1.**成分**:含有胰蛋白胨、肉浸粉、氯化钠、叠氮钠和琼脂等成分,其中叠氮钠作为选择性抑制剂,对大多数革兰氏阴性菌具有抑制作用,但允许某些革兰氏阳性菌如链球菌和葡萄球菌的生长。2.**pH值**:培养基的pH值控制在7.2±0.2(25℃),为细菌提供适宜的生长环境。3.**应用**:除了用于分离培养链球菌和葡萄球菌,叠氮钠血琼脂基础还可用于测定溶血反应。4.**溶血反应**:在该培养基上,可以观察到α溶血(培养基变绿)、β溶血(菌落周围培养基变透明)和γ溶血(培养基无变化)。**配制方法**:1.称取33.2g培养基粉末,加入1000mL蒸馏水或去离子水中。2.加热煮沸至完全溶解。3.121℃高压灭菌15分钟。4.冷却至50℃左右,加入50mL无菌羊血,混匀后倒入无菌培养皿中。**注意事项**:-避免摄入、吸入、皮肤接触叠氮钠,配制时应在通风橱中进行,并佩戴适当的个人防护装备。-培养基中含有的叠氮钠具有剧毒,应妥善处理和保存。哥伦比亚血琼脂培养皿